桃叶片伤诱导ACC氧化酶基因CDNA的克隆、序列分析其在大肠杆菌中的表达

• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 桃 ACC氧化酶基CDNA 克隆 序列分析 融合表达
• 年，卷（期）: 1998,（1）
• 页码范围: 29-35
• 页数: 7页
• 分类号: S662.1
• 语种: 中文

摘要

以桃ACC氧化酶基因组DNA为探针,与伤处理诱导后桃叶片总RNA进行点杂交,结果表明,未经伤处理的样品未能检测出杂交信号,伤处理后2－4H左右信号达到最强,将其样品MRNA反转录成CDNA,通过反转录聚合酶链式反应(PCR)得到一条0.95KB的特异性扩增产物,该扩增产物能与桃ACC氧化酶基因组探针杂交.将其克隆到加T载体上,筛选到重组克隆并进行酶谱分析表明其物理图谱与报道的完全一致;组建亚克隆并进行核苷酸序列测定,表明与桃ACC氧化酶基因组DNA的编码区核苷酸序列同源性为99.8％.将该基因克隆到表达载体PGEMEX－1,在大肠杆菌中表达出60KD左右大小的融合蛋白.