以淀粉酶基因为筛选标记的E.COLI克隆载体的构建

• 来源期刊: 南开大学学报(自然科学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: A－淀粉酶 信号肽 多克隆位点(MCS) E.COLI克隆载体 PLAM9712
• 年，卷（期）: 1998,（1）
• 页码范围: 64-71
• 页数: 8页
• 分类号: Q785
• 语种: 中文

摘要

以E.coli质粒pJRD184为基础,将多酶切点引入地衣芽胞杆菌(Bacilluslicheniformis)的a－淀粉酶基因信号肽编码区的PstI切点,构建了能表达并将a－淀粉酶(Amy)渗漏到胞外的E.coli克隆载体pLAM9712.该载体可根据在含有可溶性淀粉的LB平板上菌落周围有没有淀粉水解圈直接筛选重组子,从而避免了使用异丙基硫代－β－D－半乳糖苷(IPTG)、5－溴－4－氯－3－吲哚－β－D一半乳糖苷(X－gal),代之以廉价的碘、淀粉.实验进一步验证了pLAM9712在基因克隆中的可行性及质粒本身的稳定性.