不带抗药性基因的NIFA质粒的构建

• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 生物学
• 关键词: LEU~+基因 基因克隆 PMC71A-LEU质粒构建 阴沟肠杆菌
• 年，卷（期）: 1998,（4）
• 页码范围: 89-93
• 页数: 5页
• 分类号: Q74,
• 语种: 中文

摘要

本研究克隆了萤光假单胞菌AS1.55(PSEUDOMONASFLUORESCENSAS1.55)的亮氨酸基因(LEU+)ECORI片段(~6.6KB),并获得含有该片段的重组质粒PBR322－LEU.从PBR322－LEU质粒中分离出LEU+ECORⅠ片段,将其插入到NIFA质粒PMC71A的ECORⅠ位点使氯霉素抗性基因(CMR)失活,从而构建了不带抗药性基因的NIFA质粒PMC71A－LEU.用PMC71A－LEU转化30株LEU－水稻根际固氮菌阴沟肠杆菌E26(ENTEROBACTERCLOACAEE26),其中一株E26－1能够互补,转化频率为1*103转化子/μG质粒DNA.PMC71A－LEU在E26－1菌株中不够稳定,在LB培养基中连续培养30代后,丢失率为60％~80％.E26－1(PMC71A－LEU)与亲株E26(PMC71A)相比,耐铵固氮能力没有变化.