用双杂交系统发现与CPP32相互作用的新型分子的初步研究

• 来源期刊: 科学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 双杂交系统 CPP32 新型15肽
• 年，卷（期）: 1998,（1）
• 页码范围: 59-63
• 页数: 5页
• 分类号: Q25
• 语种: 中文

摘要

作为ICE蛋白酶家族的一员 ,CPP32 (又称Yama ,Apopain)在许多形式的凋亡途径中起极其重要的作用 .为研究调控CPP32的分子 ,该文运用酵母双杂交系统杂找与CPP32相互作用的分子 .首先将CPP32基因克隆到 pGBT9质粒载体中 ,得到的重组质粒命名为pGBT9/CPP .然后将 pGBT9/CPP转化酵母菌HF7C ,再导入人白血病文库质粒 ,用营养缺陷培养基 (TrpLeuHis)初步筛选文库中插入cDNA所编码的序列与CPP32相互作用的菌落 ,再进一步检测 β 半乳糖苷酶活性 .我们共得到 4 2个在营养缺陷培养基上生长的菌落.β_半乳糖苷酸活性检测表明 ,只有 5个菌落在显色底物X_gal的存在下变蓝色 .提取该 5个阳性酵母菌落的质粒 ,电击转化E .coliHB10 1.提取文库质粒 ,经酶切鉴定、重新转化及序列测定后发现 ,与CPP32相互作用的分子为一新型 15肽 ,推测它可能是与CPP32相互作用的结构域