弓形虫SAG1重组抗原的特征及其应用的研究

• 来源期刊: 中国人兽共患病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 弓形虫 SAG1蛋白 表达 单克隆抗体 EIA
• 年，卷（期）: 1998,（5）
• 页码范围: 24-29
• 页数: 6页
• 分类号: R38
• 语种: 中文

摘要

用昆虫细胞中表达的弓形虫主要表面抗原(SAGI)为试剂检测弓形虫IgG抗体.方法将昆虫细胞中表达的重组蛋白(rSAGI)通过单克隆抗体制备的亲和层析柱纯化.用纯化的rSAGI为抗原试剂检测弓形虫病血清,与其他试剂盒检测结果比较,然后再用免疫印迹试验确认.结果重组杆状病毒Bac304感染的Sf9细胞与空载bacmid感染的细胞比较,Bac304的SDS裂解物比空载株在SDS?PAGE考马斯亮蓝染色胶上明显多出一条带,分子量约为30kDa.在恒定条件下,分批收集Bac304感染的昆虫细胞,用免疫荧光鉴定,95％以上的细胞可被感染.在Balb/C小鼠中生产的抗SAGI的单抗XllA10C与Bac304的表达产物发生反应,用纯化的单抗与CNBr?Sepharose4B偶联制备的亲和层析柱从1.3X109感染Bac304的昆虫细胞裂解液中获得1.4mgrSAGI,以纯化rSAGI为抗原,采用EIA法检测了412份妇产科就诊者及不明原因淋巴结肿大等病人血清,检出弓形虫lgG抗体阳性13例,其中10例经全虫体蛋白印迹法确认为阳性.结论昆虫细胞表达的重组SAG1能识别人弓形虫病血清,可以用作诊断试剂.