重组人促红细胞生成素cDNA在CHO-dhfr-细胞中的高效表达

• 作者: 刘小萍 曹韫旭 陆德如 陈坚
• 来源期刊: 第二军医大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 红细胞生成素 基因重组 真核表达
• 年，卷（期）: 1998,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 530-532
• 分类号: Q784
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0258-879X.1998.06.009

摘要

目的:使重组人促红细胞生成素(rhEPO)在CHO细胞中获得高效表达.方法: 利用基因重组构建了两个人促红细胞生成素cDNA重组表达质粒pED-EPO 和 pEF-EPO,分别用 DEAE-dextran 法转染COS7细胞,作瞬时高表达,选pEF-EPO用磷酸钙共沉淀法转染 CHO-dhfr-细胞,加入氨甲喋呤(MTX)扩增、选择,作稳定性高表达. 结果: pED-EPO 和 pEF-EPO转染COS7细胞后72 h表达量分别为17.8和21.0 ng/ml,pEF-EPO 转染 CHO-dhfr-细胞,随着MTX浓度的增加,CHO-dhfr+的克隆数减少,而混合克隆的EPO表达量逐渐升高.筛选了一株稳定性高表达rhEPO的细胞株,其3 d表达量为16 μg/ml.结论:rhEPO在CHO细胞中获得了高表达.