PFU酶基因的克隆、表达、纯化及长距离PCR的研究

• 来源期刊: 科学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: PFU酶 PET3D 长距离PCR
• 年，卷（期）: 1998,（5）
• 页码范围: 527-532
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

用PCR方法从Pyrococcusfuriosus的总DNA扩增出了含有PfuDNApolA基因的 2 .3kb片段 ,并将该基因克隆入pGEM T载体 .用NcoⅠ和XhoⅠ对重组质粒 pT pfu进行酶切 ,并将 pfupolA基因插入表达载体pET 3d X .在大肠杆菌BL2 1(DE3)中将pfupolA基因进行表达 ,然后用热变性、聚乙二胺 (PEI)沉淀和Bio rex 70离子交换法对其基因产物 (Pfu酶 )进行纯化 .用蛋白质N 末端测序法证实了确为重组Pfu酶 .利用重组Pfu酶 ,成功地用长距离PCR法扩增出大于 10kb的λDNA片段 .