部分抑制CDK4基因的表达导致V79-8细胞的G1期的延长

• 来源期刊: 科学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: CDK4 V79-8 反义转染 细胞倍增时间
• 年，卷（期）: 1998,（18）
• 页码范围: 1958-1963
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

V798细胞是一个没有可测定G1和G2期的变异细胞株 ,其母系细胞系V79有G1期 ,但没有G2期 ,为了探讨V798的G1期缺乏是否与CDK4的调控有关 ,研究了CDK4对其细胞周期的影响 .构建反义CDK4质粒转染V798细胞筛选得到V798asCDK4细胞 ,通过研究V798asCDK4与对照组细胞的细胞生长曲线 ,测定其细胞的GT(细胞倍增时间 ) ,用FCM测定细胞周期中各个周期时相所占的比例 ,比较各期细胞数量的变化 ,同时检测其内源CDK4及其他增殖相关基因的表达 .V798asCDK4生长变缓慢 ,GT时间约增长了 2 .5h ,FCM结果G2 +M无明显变化 ,而G1期比对照组明显增加 ,因此 2 .5h主要是出现了G1期所致 .Northern杂交结果表明 ,V798asCDK4细胞中内源CDK4的表达降低 ,cyclinD1及Rb略有减少 ,TGFβ表达增加 ,而cyclinB1无明显变化 .CDK4主要在G1及G1 /S起作用 ,反义CDK4转染V798细胞可部分抑制CDK4mRNA的表达 ,降低CDK4/cyclinD激酶复合物水平 ,降低了Rb的磷酸化程度 ,延长G1期过程 ,而G1 /S转换处也因受到检验点的调控而出现了延迟 ,导致出现明显的G1期 .