利用GFP示踪细胞内源性P53活性检测DNA损伤

• 作者: 丁亮 夏宁邵 曾位森 曾定 罗琛 谢卫兵 黄宗平
• 来源期刊: 遗传
• 学科: 医学
• 关键词: 绿色荧光蛋白 P53 DNA损伤 检测
• 年，卷（期）: 1999,（3）
• 所属期刊栏目: 遗传快报
• 页码范围: 5-8
• 分类号: Q523|R394-3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0253-9772.1999.03.002

摘要

DNA损伤的检测对预防癌症和遗传病等非常重要.采用分子克隆技术,将报告基因-绿色荧光蛋白(GFP)置于SV40基本启动子调控下,构建成对照载体pSV-GFP.在SV40基本启动子上游插入寡核苷酸P53RE,构建成示踪载体p53RE-GFP.转染NIH 3T3细胞,以GFP示踪细胞内源性P53的转录激活活性.紫外线照射或H2O2处理转化细胞使DNA损伤,诱导细胞内源性P53的表达.用激光扫描共聚焦成像系统(LSCIS)对细胞进行红、绿、蓝三色光融合成像,并测定GFP经488nm激发后发出的绿色荧光光密度,验证GFP示踪P53的特异性.p53RE-GFP转化细胞3T3-REG经紫外线照射或H2O2处理后,GFP的表达增高,处理后1hr光密度即达到最高水平,随后逐渐降低.血清"饥饿"-非DNA损伤处理的3T3-REG细胞,以及经紫外和H2O2处理的对照载体pSV-GFP转化细胞3T3-SVG,GFP的表达无明显增强.实验表明:GFP示踪内源性P53转录激活活性用于检测DNA损伤有很高的灵敏度和特异性,适宜推广应用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曾位森	第一军医大学生物与遗传教研室	15	168	8.0	12.0
2	夏宁邵	厦门大学肿瘤细胞工程国家专业实验室	87	628	14.0	23.0
3	曾定	厦门大学肿瘤细胞工程国家专业实验室	4	39	2.0	4.0
4	罗琛	第一军医大学生物与遗传教研室	4	15	3.0	3.0
5	谢卫兵	第一军医大学生物与遗传教研室	3	11	2.0	3.0
6	丁亮	厦门大学肿瘤细胞工程国家专业实验室	4	24	4.0	4.0
7	黄宗平	厦门大学肿瘤细胞工程国家专业实验室	1	5	1.0	1.0