TNF-α的合成分泌机制不同于一般的分泌型蛋白

• 作者: 徐勇 曾劲杨 李卓娅 熊平 龚非力
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肿瘤坏死因子 体外转录翻译系统 信号肽类
• 年，卷（期）: 1999,（1）
• 所属期刊栏目: 细胞因子
• 页码范围: 66-69
• 分类号: R3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.1999.01.027

摘要

目的 拟借助微粒体膜和体外转录翻译系统来研究分泌型TNFα(S-TNF-α)的产生机制及S-TNF-α和跨膜型TNFα(TM-TNF-α)的关系.方法 首先将分子量为17×103 S-TNF(不含编码TNF信号肽的基因)、26×103 TM-TNF(含信号肽基因)和17×103 S-TNF突变体(S-TNFm,用IL-2信号肽密码子置换TNF信号肽序列)的全长cDNA片段分别亚克隆于含T7启动子的pGEM-3Zf载体,然后利用体外转录翻译系统,在微粒体膜存在和不存在的情况下,体外翻译合成S-TNF、TM-TNF及其S-TNFm.结果 经Western blot 分析结果表明:微粒体的存在并不改变26×103 TM-TNF的分子量,但微粒体的存在能将S-TNFm上的IL-2信号肽切除,证实TNF引导序列与一般分泌性蛋白的"信号肽"不同,在粗面内质网翻译过程中不被切除.进一步酶切分析表明TM-TNF是通过某些金属蛋白酶酶解作用而被转换成S-TNF的.结论 实验结果提示17×103 S-TNF产生机制可能是:TNF产生细胞经LPS等激活后,导致TNF基因转录翻译增加,首先形成26×103 TNF,并借助其信号肽疏水氨基酸部分将之"锚定"在细胞膜,成为跨膜型TNF,介导细胞与细胞之间的生物学效应;在某些蛋白酶作用下,可将mTNF的"信号肽"切除,产生17×103分泌型TNF,释放至体液中,在局部或全身发挥作用.