应用反向PCR方法进行YAC末端的分离分析

• 作者: 刘晓军 邹雅群 郭辰虹 陈丙玺 龚瑶琴
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 反向聚合酶链式反应 酵母人工染色体末端 酵母人工染色体重叠群
• 年，卷（期）: 1999,（1）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 44-46
• 分类号: R4
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1003-9406.1999.01.013

摘要

目的 建立有效分离酵母人工染色体(yeast artificial chromosome,YAC)末端的方法.方法 根据反向PCR原理,在分析YAC载体DNA序列的基础上,选用YAC载体上存在切点的限制性内切酶酶解YAC DNA,通过连接反应形成环状DNA分子,再用与YAC载体两末端互补的引物进行扩增,扩增产物经进一步纯化后测序,即可得到YAC末端的序列.结果 用反向PCR方法,分别从776E2、964C5、11D8和8D1共4个YAC分离得到各自的左右末端.结论 该方法简便、有效,适用于所有的YAC克隆.