普通小麦7B染色体的显微分离和低拷贝专化DNA序列的克隆

• 作者: 何孟元 刘宝 刘振兰 戎均康 董英山 郝水 韩方普 黄百渠
• 来源期刊: 科学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 小麦 染色体显微分离 DOP-PCR 专化DNA序列
• 年，卷（期）: 1999,（4）
• 所属期刊栏目: 简报
• 页码范围: 389-392
• 页数: 5页
• 分类号: Q94
• 字数: 4343字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0023-074X.1999.04.013

摘要

以普通小麦"中国春"7B单体的花粉母细胞为材料,显微分离出7B染色体.经蛋白酶K和DNA拓扑异构酶Ⅰ处理后进行1～3轮DOP-PCR扩增,产生了150～700 bp 的连续DNA片段.基因组Southern杂交证实扩增的DNA源自小麦基因组.将大于200 bp的第3轮PCR扩增产物(50 μL)克隆后,可产生20 000个重组克隆.对随机选取的50个克隆分析表明,其中21个克隆产生了大小为240～600 bp的清晰PCR产物.点杂交结果表明,21个克隆中11个(～55%)为低拷贝序列,10个(～45%)为重复序列.对"中国春"全套"缺体-四体"基因组DNA的Southern杂交结果表明,产生清晰杂交谱带的6个低拷贝克隆均为7B染色体专化或第7部分同源群专化序列;而随机选取的3个重复序列则为没有专化性的弥散型重复序列.