反义GFAP逆转录病毒表达载体的构建及其对反应性星形胶质细胞的作用

• 作者: 张可成 蔡文琴 黄其林
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 星形胶质细胞 逆转录病毒 胶原纤维酸性蛋白 脑损伤
• 年，卷（期）: 2000,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 102-107,插图第1页
• 页数: 7页
• 分类号: Q189
• 字数: 455字
• 语种: 英文
• DOI: 10.3321/j.issn:0529-1356.2000.02.002

摘要

目的构建反义GFAP逆转录病毒表达载体,评价其对培养正常及损伤星形胶质细胞(Ast)形态及GFAP基因表达的影响. 方法用定向克隆技术,将1.1kb的GFAP基因片段反向插入逆转录病毒载体pLXSN上,获得重组体PLBskG,经病毒包装、抗性克隆筛选、滴度测定等,挑选滴度高的抗性克隆细胞株扩展培养,收获病毒上清液感染体外培养的Ast,通过免疫组织化学、原位杂交、RT-PCR、Southern blot和流式细胞仪分析等方法,研究PLBskG对正常及损伤Ast的生长、细胞增殖周期、细胞形态结构、GFAP基因表达的影响. 结果插入PLBskG中的GFAPcDNA片段序列、方向完全正确,Southern杂交及RT-PCR分析表明,PLBskG成功整合入PA317细胞中,并实现了在NIH3T3细胞中的表达.PLBskG使正常及反应性Ast生长抑制,G1期阻滞,Ast胞体变圆、胞浆减少、突起变细、回缩,核浆比例增大.GFAP免疫组织化学染色减弱;GFAP mRNA表达水平降低. 结论获得了构建正确的反义GFAP逆转录病毒表达载体,并证实其对正常及反应性Ast形态结构、GFAP表达水平等均有明显的影响,为深入研究Ast反应及GFAP基因的功能创造了条件.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄其林	第三军医大学新桥医院神经外科	63	309	10.0	14.0
2	蔡文琴	第三军医大学组织学胚胎学教研室	188	1499	18.0	27.0
3	张可成	第三军医大学新桥医院神经外科	74	376	10.0	17.0