hTERT基因片段的克隆、表达和抗hTERT抗体用于端粒酶及hTERT检测的研究

• 作者: SAID A. Saleh 任大明 孙建龙 张伯生 沈先荣 陈昭 黄建生
• 来源期刊: 实验生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 端粒酶 hTERT 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2000,（3）
• 页码范围: 229-236
• 页数: 7页
• 分类号: Q81
• 字数: 5540字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-520X.2000.03.005

摘要

端粒酶是一种重要的肿瘤生物学标志,其活性在生殖细胞、绝大多数肿瘤细胞和体外培养的永生细胞可以测知,但在大多数体细胞中不易测出.人端粒酶由两部分组成,包括hTERC和hTERT,hTERC在正常细胞和肿瘤细胞中均有表达,而hTERT的表达似乎受到严格的调控且和端粒酶活性一致.为了检测肿瘤细胞中端粒酶及hTERT的表达,我们制备了抗hTERT蛋白的特异性多克隆抗体.首先用RT-PCR方法克隆了hTERTcDNA的一个片段,将其连接到GST融合表达载体pGEX-5X-3后在大肠杆菌中融合表达.将纯化的融合蛋白抗原免疫动物,制备抗hTERT蛋白的多克隆抗体.不同的细胞抽提物用该抗体进行了Westernblot分析,结果表明该抗体可特异识别端粒酶阳性细胞株中的hTERT及端粒酶,为端粒酶及hTERT的检测初步提供了一个简单有效的检测手段.