两种DNA探针杂交检测结核分支杆菌方法的研究

• 作者: 庄玉辉 李国利 李邦印 杨华卫 杨树德
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 寡核苷酸探针 188bp DNA探针 斑点杂交 敏感性与特异性
• 年，卷（期）: 2000,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 143-149
• 页数: 7页
• 分类号: Q939.13
• 字数: 3335字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0001-6209.2000.02.006

摘要

为改进结核杆菌DNA探针的特异性与实用性,研制了以生物素标记的两种对结核分支杆菌特异的DNA探针:一个5'端标记的20bp的寡核苷酸探针和一个采用PCR方法合成的188bp长链探针.两种探针分别与结核分支杆菌的全染色体DNA,以及基因组上IS6110序列的一段317bp的PCR扩增产物进行斑点杂交,以碱性磷酸酶(AP)催化的染色反应检测,测试了两个探针的敏感性和特异性.系统地比较研究了两种探针杂交检测条件:探针的浓度选择,杂交温度与洗膜温度的选择,以及杂交与洗膜温度对检测的敏感性与特异性的影响.寡核苷酸探针和188bp探针杂交检测纯化结核分支杆菌基因组DNA的敏感性分别为100ng与6ng,杂交检测PCR产物的敏感性分别是400pg与50pg.两探针的最佳杂交浓度均为40～160ng/ml,最佳杂交温度分别是42℃与68℃,最佳洗膜温度分别是60℃与60～68℃之间.两种探针均仅与结核分支杆菌及BCG有杂交信号,而与其它受试分支杆菌及非分支杆菌杂交结果都呈阴性.它们的特异性都很强,但188bp探针的敏感性约是寡核苷酸探针的7～16倍,而且188bp探针检测本底较低,是检测结核分支杆菌的较佳选择.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	庄玉辉	解放军309医院结核病研究室	17	143	9.0	10.0
2	李邦印	解放军309医院结核病研究室	3	25	3.0	3.0
3	李国利	解放军309医院结核病研究室	6	83	5.0	6.0
4	杨华卫	北京医院卫生部临床检验中心	1	5	1.0	1.0
5	杨树德	北京医院卫生部临床检验中心	2	14	2.0	2.0