猪瘟病毒糖蛋白E0基因的克隆及其表达研究

• 作者: 丁明孝 周鹏程 翟中和 陈建国
• 来源期刊: 微生物学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 猪瘟病毒 EO基因 克隆表达
• 年，卷（期）: 2000,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 165-170
• 页数: 6页
• 分类号: Q933
• 字数: 2280字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-2654.2000.03.003

摘要

用RT-PCR方法扩增分别获得了中国猪瘟病毒强毒石门株和兔化弱毒株糖蛋白EO基因cDNA,并克隆到pGEM T载体中测定其核苷酸序列和推导出其对应氨基酸序列,结果表明这两个毒株间的EO基因核苷酸序列同源性为95.3%,氨基酸序列同源性为94%,有14个残基的差异;与几个代表毒株ALD株、GPE株、Brescia株、Alfort株和国外测得的兔化弱毒C株相应序列进行比较,所测石门病毒核苷酸序列与上述各株对应序列的同源性分别为98.0%、97.1%、92.7%、86.8%和95.4%;氨基酸序列同源性分别为97.4%、96.1%、95.3%、92.7%和94.4%;所测兔化弱毒核苷酸序列与上述各株对应序列的同源性分别为95.2%、94.6%、91.3%、85.1%和99.0%;氨基酸序列同源性分别为93.1%、92.3%、91.4%、90.5%和98.7%;氨基酸序列分析结果还表明:上述各株病毒糖蛋白E0序列均含有与地衣类及植物核苷酸酶同样保守的两个氨基酸基序SLHGIWPX(X为G或E)和EWNKHGWC,基序中H为RNase催化活性关键氨基酸残基;将上述EO基因亚克隆至真核表达载体pEGFP-Cl,构建了真核表达载体pEGFP-E0,用脂质体转染法将pEGFP-E0 DNA导入PK-15细胞进行瞬时表达,以绿色荧光蛋白GFP为标志蛋白,荧光显微镜观察结果表明EO蛋白主要位于细胞的胞浆内,这与病毒感染PK-15细胞后EO在细胞内的分布结果一致;同时还构建了能在昆虫细胞Sf9细胞中表达GST-E0融合蛋白的重组杆状病毒.上述实验结果为继续深入研究F0蛋白在猪瘟病毒的复制及病毒感染的宿主细胞致病机制中的作用,提供了基础材料及参考数据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周鹏程	北京大学生命科学学院细胞及遗传学系	4	51	3.0	4.0
2	陈建国	北京大学生命科学学院细胞及遗传学系	20	178	8.0	13.0
3	翟中和	北京大学生命科学学院细胞及遗传学系	42	314	8.0	16.0
4	丁明孝	北京大学生命科学学院细胞及遗传学系	25	215	8.0	14.0