鸡痘病毒载体启动子的优化

• 作者: 刘秀梵 张如宽 彭大新 朱爱华
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 人工合成 强启动子 β-半乳糖苷酶的活性 鸡痘病毒
• 年，卷（期）: 2000,（4）
• 所属期刊栏目: 人与动物病毒
• 页码范围: 347-351
• 页数: 5页
• 分类号: Q782
• 字数: 3399字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-8721.2000.04.013

摘要

要提高外源基因在鸡痘病毒(FPV)载体的表达量,必须使用强启动子来控制表达.为构建较强的启动子组合,根据痘苗病毒天然启动子P7.5的结构,人工合成4条寡核苷酸,形成一个早期启动子和一个晚期启动子,其首尾可相互连接.利用分子生物学常用实验方法把合成的启动子进行不同组合,最终形成10个较有代表性的启动子组合PS1～10.在其下游插入大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因LacZ,并进一步构建成鸡痘病毒转移载体pFBS1～10,同时以P7.5作对照构建成pFB7.5.以脂质体介导转染鸡痘病毒中国疫苗株282E4感染3h～4h后的原代鸡胚成纤维细胞(CEF)单层.用蓝斑筛选法纯化病毒4次,最终得到稳定的重组病毒.将纯化的重组病毒感染次代CEF,分别于感染后10h、24h、36h、48h、72h收获细胞,制备提取物,检测提取物中β-半乳糖苷酶的活性.通过计算比较,筛选出其中较强的启动子组合LLEE,其表达活性约为P7.5的3.5倍,为进一步构建高效表达的鸡痘病毒通用载体打下了良好的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘秀梵	扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室	373	3732	28.0	39.0
2	彭大新	扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室	133	1222	21.0	28.0
3	张如宽	扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室	72	1152	20.0	29.0
4	朱爱华	扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室	8	91	5.0	8.0