DNA循环测序中一些常见影响因素的研究

• 作者: 何云贵 夏家辉 夏昆 房海燕
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: DNA 循环测序 因素
• 年，卷（期）: 2000,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 122-124
• 页数: 3页
• 分类号: R4
• 字数: 2523字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1003-9406.2000.02.016

摘要

目的 研究DNA循环测序中一些常见因素的影响.方法 对循环测序中模板、引物、测序反应条件及其产物的纯化等常见因素进行了比较研究.结果 测序模板浓度过低,则核苷酸曲线的信:噪比小,甚至不出现荧光信号.模板浓度过高,判读的核苷酸长度降低;引物的长度、G+C含量及Tm值对测序结果无明显影响;模板中的离子对测序反应有抑制作用;改变变性、退火及延伸温度,以及加入二甲基亚砜(DMSO)或甘油对某些DNA模板的序列测定有较好的效果;测序反应产物纯化后如有残余的荧光染料,则会干扰测序仪对核苷酸的自动判读,但序列能进行人工校正.结论 序列质量与模板的纯度、浓度有明显的关系.对一些具有特殊结构DNA,调整循环反应条件或使用添加剂能获得较好测序结果;利用70%乙醇沉淀法是首选的测序反应产物纯化方法.