产气荚膜梭菌β-毒素基因的克隆及CPB-ST融合基因的构建

• 作者: 冯书章 朱平 殷震 王玉炯 许崇波
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 产气荚膜梭菌 β-毒素基因 ST基因 融合基因
• 年，卷（期）: 2000,（4）
• 页码范围: 372-378
• 页数: 8页
• 分类号: S852.65+
• 字数: 3831字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2000.04.015

摘要

用聚合酶链式反应(PCR)技术,从B型产气荚膜梭菌染色体基因组中扩增了930bp的β-毒素基因.用限制性核酸内切酶BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ对PCR产物进行双酶切处理,然后,通过T4 DNA连接酶将其定向连接于事先经同样的双酶切处理的载体质粒pET-28C(+)的多克隆位点,转化至受体菌BL21(DE3)中.经BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切分析和PCR扩增检测.证明重组质粒pECB2中含有产气荚膜梭菌的β-毒素基因.经核苷酸序列分析,明确了克隆的β-毒素基因在重组质粒中的连接向位和阅读框架是正确的.利用已构建的另一重组质粒pXST1(带有肠毒素性大肠杆菌的耐热性肠毒素ST基因),通过EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切处理,将切下的ST基因片段定向连接到pECB2重组质粒中CPB基因的下游.经特定酶切分析鉴定,得到了理想重组子质粒pECB-ST1,CPB-ST融合基因在重组质粒pECB-ST1中的连接向位是正确的.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	殷震		23	164	7.0	12.0
2	王玉炯	宁夏大学生物工程系	108	671	13.0	20.0
3	许崇波		5	38	4.0	5.0
4	冯书章		4	31	3.0	4.0
5	朱平		3	28	2.0	3.0