鸡毒支原体PCR检测及特异扩增片断的克隆与测序

• 作者: 任家琰 郭建华 霍乃蕊
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: MG PCR 克隆 测序
• 年，卷（期）: 2000,（1）
• 页码范围: 49-55
• 页数: 7页
• 分类号: S85
• 字数: 3068字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2000.01.008

摘要

根据E.R.Nascimento等从鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepricum,MG)基因文库分离的种特异性片段fMG-2序列,设计合成一对长25bp的引物L1R1,经PCR反应条件优化选择,对5株MG DNA扩增均产生出预期的732bp特异扩增片断,而不能扩增滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)、E.coli、PUC19质粒DNA,符合设计要求;DIG随机引物法标记扩增产物制成DNA探针,与上述菌株DNA Dot-blot杂交,MG呈阳性,其它为阴性;将扩增产物克隆于pGEM-T载体,经EcoRI和RsaI酶切,证实克隆片段与目的DNA大小及酶切位点相同;测序结果表明扩增片段与fMG-2靶序列同源性达97.2%,与已发表的DNA序列无明显同源性.说明所建PCR方法种特异性强,特异扩增片段克隆成功.