卵巢癌抗独特型单链抗体6B11ScFv/mGM-CSF融合蛋白的构建、表达及活性测定

• 作者: 付天云 冯捷 刘蓓 叶雪 姚煜 崔恒 曹善津 李艺 葛华 钱和年
• 来源期刊: 解剖学报
• 学科: 医学
• 关键词: 卵巢癌 重组融合蛋白 抗体 抗独特型 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 包涵体
• 年，卷（期）: 2000,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 226-230
• 页数: 5页
• 分类号: R392.11
• 字数: 4094字
• 语种: 英文
• DOI: 10.3321/j.issn:0529-1356.2000.03.009

摘要

目的构建卵巢癌抗独特型单链抗体6B11ScFv和鼠GM-CSF融合蛋白(6B11mGM),以观察其在动物体内诱导的特异性免疫反应,为卵巢癌抗独特型疫苗应用于临床提供依据. 方法用DNA重组技术,将mGM-CSF连于单链抗体6B11ScFv羧基末端,构建重组质粒pET30-6B11mGM,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导,以包涵体形式获高效表达,超声破碎细菌细胞获得包涵体,用8mol.L-1尿素溶解包涵体后直接稀释复性,SDS-PAGE分析蛋白纯度,ELISA分析技术和细胞增殖实验测定融合蛋白的抗体和细胞因子活性. 结果复性蛋白纯度达90%以上.采用氧化型谷胱甘肽(GSSG)浓度为1mmol.L-1,还原型谷胱甘肽(GSH)浓度为5mmol.L-1,10℃复性48h,复性率达36%.表达的融合蛋白分别能与COC166-9单抗和大鼠抗小鼠GM-CSF单抗特异结合,并能刺激mGM-CSF依赖株NFS-60细胞增殖. 结论以包涵体表达的融合蛋白6B11mGM保留了两种蛋白的活性,为研究融合蛋白在体内的免疫功能提供了基础.