RT-PCR法分离伊氏锥虫VSG基因的研究

• 作者: 周金林 沈杰
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 伊氏锥虫 VSG基因 分离
• 年，卷（期）: 2000,（3）
• 页码范围: 277-280
• 页数: 4页
• 分类号: S85
• 字数: 2356字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0366-6964.2000.03.015

摘要

应用异硫氰酸胍一酚一氯仿一步法分离伊氏锥虫安徽株克隆虫体ShTatl的二个抗原变异体ShTat1.3和ShTat1.5总RNA,在含有甲醛的琼脂糖凝胶电泳后,转印到硝酸纤维膜上.根据布氏锥虫VSGmRNA3'端保守序列,设计合成了一个互补于它的含十八个碱基的寡核苷酸5'-GGTGTTAAAATATATCAG-3',经32P标记,Northern杂交,首次证明伊氏锥虫含有同样的保守序列.利用合成的十八碱基寡核苷酸作为反转录特异引物,成功合成cDNA第一链,以cDNA第一链作为PCR扩增模板,均能特异性的扩增出一条主带为1.5kb的DNA,与VSG基因大小相符.根据所有锥虫mRNA在5'端的保守序列,设计合成了RT-PCR下游引物5'-GAACAGTTTCTGTACTATATTG-3'.对伊氏锥虫安徽株克隆虫体的二个变体ShTat1.3和ShTat1.5的RNA,进行RT-PCR扩增,均特异性地分离出VSG基因,二个变异体VSG基因大小差异显著,其中ShTat1.3的VSG基因为1.7kb,而ShTat1.5的VSG基因则为1.4kb.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周金林	中国农科院上海家畜寄生虫病研究所	12	118	5.0	10.0
2	沈杰	中国农科院上海家畜寄生虫病研究所	19	47	4.0	6.0