DNA修复蛋白MGMT基因的克隆及转导脐血CD34+细胞后耐药特征的研究

• 作者: 卢大儒 夏学鸣 王季石 薛京伦 阮长耿 陈子兴
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 六氧甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶基因 逆转录病毒载体 造血干细胞 基因疗法 脐血
• 年，卷（期）: 2000,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 395-398
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3859字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1003-9406.2000.06.005

摘要

目的 增强脐血CD34+造血细胞对化疗药物的耐药表型,探讨逆转录病毒介导的基因转移效率和耐药基因特性,以及在脐血造血干细胞保护性基因治疗中的作用和意义.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从人肝组织中获得编码六氧甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA-methyltransferase,MGMT)cDNA;利用基因重组技术,将其克隆于pGEM-T质粒载体并构建了逆转录病毒载体G1Na-MGMT;应用脂质体LipofectAMINE基因转移法将后者导入GP+E86和PA317病毒包装细胞,以卡氮芥1,3-Bis(2-Chloroethyl)-1-Nitrosourea(BCNU)加压筛选后的阳性克隆上清经乒乓效应后继而感染脐血CD34+细胞.应用PCR,Southern Blot,RT-PCR,Northern blot,Western Blot及MTT法检测MGMT基因在脐血CD34+细胞中的转移和表达.结果 酶切鉴定及DNA测序证实了MGMT cDNA克隆的正确性,脂质体介导方法成功将其导入病毒包装细胞,BCNU加压筛选和乒乓感染法使病毒效价达1.6×106CFU/ml,逆转录病毒载体介导的MGMT基因在脐血造血干细胞中获得了有效转移和表达.转MGMT耐药基因脐血造血干/祖细胞对BCNU的抗药性较对照组提高了4倍.结论 DNA修复蛋白MGMT基因的克隆并导入脐血造血干/祖细胞可以明显提高靶细胞的耐药性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢大儒	复旦大学遗传学研究所	137	982	17.0	25.0
2	薛京伦	复旦大学遗传学研究所	51	228	8.0	13.0