RT-PCR技术在流行性出血热病毒分型诊断中的应用

• 作者: 张淑玲 曾令兰 郑曲波
• 来源期刊: 临床内科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 反转录聚合酶链反应 流行性出血热 流行性出血热病毒
• 年，卷（期）: 2000,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 231-233
• 页数: 3页
• 分类号: R512.8
• 字数: 1706字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-9057.2000.04.017

摘要

目的运用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对流行性出血热(EHF)病人标本进行研究,以建立一项有效的EHF病毒分型诊断方法.方法收集发病10 d以内的早期EHF病人血浆、外周血单个核细胞(PBMC)、尿沉淀细胞.采用异硫氰酸胍-酚-氯仿一步抽提各种标本的总RNA.两对特异性引物分别互补于汉滩病毒(Ⅰ型)及汉城病毒(Ⅱ型)M基因片段的G1区.分别在两对引物的正链引导下反转录合成特异性cDNA,用相应的引物对进行PCR扩增.产物经琼脂电泳,标准分子量对照鉴定.同时以Vero-E6细胞及鼠脑传代的标准病毒株进行阳性对照,以正常人血浆作阴性对照.结果 19例病人的30份标本均能被I型或Ⅱ型引物扩增出特异性产物,其中I型阳性13例,Ⅱ型阳性4例,I、Ⅱ型同时阳性2例,同一病人的不同标本结果一致.结论标准病毒株RT-PCR分型结果与其本身的血清型一致.