含稳定整合pMCLacI/Neo质粒的NIH3T3细胞体外突变研究模型的建立

• 作者: 傅继梁 卢洋 黎怀星
• 来源期刊: 中华医学遗传学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基因突变 lacI基因 NIH3T3细胞 转录 质粒
• 年，卷（期）: 2000,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 125-128
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3970字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:1003-9406.2000.02.017

摘要

目的 建立一个用于比较研究哺乳动物细胞内表达基因和沉默基因的突变机理的实验模型.方法 以脂质体转染法将线性化的pMCLacI/Neo质粒导入NIH3T3细胞,用G418筛选,选择一个药物抗性细胞克隆进行扩增,用基因组Southern杂交,RT-PCR及RT-PCR Southern杂交进行分子鉴定.结果 (1)在此细胞克隆的基因组中整合有pMCLacI/Neo质粒;(2)该质粒上的两个lacI靶基因中,有一个在NIH3T3细胞内处于转录表达状态;(3)可以通过酶切环化的方法从阳性细胞克隆的基因组DNA中回收出结构完整、功能正常的pMCLacI/Neo质粒.结论 建立了在基因组中整合有pMCLacI/Neo质粒的NIH3T3细胞系;两个lacI靶基因可分别模拟哺乳动物细胞内表达基因和沉默基因的功能状态;可以将该细胞系用作研究哺乳动物细胞内表达基因和沉默基因的不同突变机理的实验模型.