双拷贝截短型人胰岛素样生长因子Ⅰ基因的构建、表达和鉴定

• 作者: 刘晓辉 孙贺英 梁述文
• 来源期刊: 中国药理学报(英文版)
• 学科: 医学
• 关键词: 基因表达 胰岛素样生长因子Ⅰ 聚合酶链反应 超滤 电泳
• 年，卷（期）: 2001,（7）
• 所属期刊栏目: 研究原著
• 页码范围: 624-628
• 页数: 5页
• 分类号: R96
• 语种: 英文

摘要

目的：增加重组截短型胰岛素样生长因子Ⅰ[des(1-3)IGF-Ⅰ]的表达产量，初步纯化表达产物后并与标准IGF-Ⅰ比较其生物活性.方法：将第二个des(1-3)IGF-Ⅰ基因插入先前构建好的pExSecl/IGF-Ⅰ表达质粒中，形成pExSecl/2(IGF-Ⅰ)的表达质粒.将质粒转化入蛋白酶缺陷的大肠杆菌BL21(DE3)中，培养工程菌并用IPTG于12℃低温诱导des(1-3)IGF-表达.超滤膜过滤和Sephadex G-50凝胶过滤纯化表达产物.用MTF法测定纯化的IGF-Ⅰ的生物活性，并与标准IGF-Ⅰ比较.结果：双拷贝IGF-Ⅰ的表达量达可溶性菌体蛋白的20％，高于单拷贝IGF-Ⅰ的表达产量(12％)；超滤和凝胶过滤后des(1-3)IGF-Ⅰ纯度分别达49％和82％；经凝胶过滤后的IGF-Ⅰ相对生物活性达标准IGF-Ⅰ的77％.结论：pExSecl/2(IGF-Ⅰ)可增加IGF-Ⅰ表达产量约8％；纯化后的des(1-3)IGF-Ⅰ生物活性为标准IGF-Ⅰ的77％.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘晓辉	山西大学生命科学系	12	110	4.0	10.0
2	孙贺英	山西大学生命科学系	1	0	0.0	0.0
3	梁述文	山西大学生命科学系	1	0	0.0	0.0