风信子花器官中HAP2基因的分离与表达研究

• 作者: 张宪省 李全梓 李兴国 白书农 陆文梁
• 来源期刊: 发育与生殖生物学学报（英文版）
• 学科: 生物学
• 关键词: Hyacinthus orientalis regenerated floral organ HAP2
• 年，卷（期）: 2001,（1）
• 页码范围: 69-75
• 页数: 7页
• 分类号: Q94
• 语种: 英文

摘要

在离体条件下,以风信子花被片为外植体,通过控制激素的浓度可诱导花被片、雄蕊或胚珠的再生.近年来,在拟南芥和金鱼草等模式植物中已经分离出了许多控制花器官发育的同源异形基因,如AG,AP1,AP2,AP3等,其中AP2在控制花萼和花瓣形成过程中起重要作用,因此本文从风信子中分离AP2的同源基因,并对它在风信子再生系统中的表达进行了分析.根据AP2同源基因功能域的保守序列设计一对简并引物:5'-TGGGA(A/G)TC(G/T/C)CA(C/T)AT(C/T)TGGA-3'和5'-TCCCA(AGC)(CT)(GT)(AG)CC(AG)CA(CT)TT(AG)TG-3',以再生的花被片为材料进行RT-PCR,扩增出大小约300bp的片段,序列分析表明该片段的氨基酸序列与AP2同源性高达89%.进而,利用5'和3'RacePCR,得到全长的cDNA.该基因命名为HAP2,GenBank登记号为AF134116,该基因全长1597bp,编码368个氨基酸饵ig.1).与AP2相比,HAP2也含有10个氨基酸长的碱性功能域,其中KKSR为核定位信号.此外,HAP2也含有两个序列重复的68个氨基酸长的功能域(HAP2-R1,HAP2-R2),HAP2-R1也含有能形成α-螺旋结构的核心区域,且与AP2-R1中的核心序列100%同源,而HAP2-R2中的核心区域与AP2-R2相比,缺少9个氨基酸(Fig.2).RT-PCR结合Southern杂交结果表明(Fig.3),HAP2在叶、花被片中表达,其表达方式与AP2一样.此外,在再生花被片和再生雄蕊中也检测到HAP2的表达.进一步,利用原位杂交技术分析HAP2在风信子花器官再生过程中的表达将对于激素调节的花发育的机理有更深入的理解.