一种新型单链抗体血栓导向显像剂的制备和部分性质研究

• 作者: 俞梅敏 周波 孙艳 茹炳根 陈昱
• 来源期刊: 中国生物化学与分子生物学报
• 学科: 医学
• 关键词: 血栓导向显像剂 金属硫蛋白 单链抗体 分离纯化 性质
• 年，卷（期）: 2001,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 781-785
• 页数: 5页
• 分类号: TQ92|R445
• 字数: 4402字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7626.2001.06.021

摘要

利用对血栓部位活化血小板α-颗粒膜蛋白GMP-140有亲和特异性的单克隆抗体SZ51的血栓部位导向作用,并利用金属硫蛋白的高金属结合能力,在基因工程水平构建分子量适中的单链抗体血栓导向显像剂.1分子单抗SZ51单链抗体(ScFv-SZ51)与1分子小鼠金属硫蛋白(MT-Ⅰ)cDNA的重组基因拼接产物,在大肠杆菌菌株BL21(DE3)pLysS中进行发酵表达,重组蛋白HLMT表达量为40mg/L发酵液.该重组蛋白以包涵体形式存在于菌体中.通过一种有效的包涵体制备方法可获得目的蛋白含量为84%的包涵体沉淀.在优化的条件进行了包涵体的变复性,复性液先后经过Q-Sepharose FF阴离子交换层析和Sephadex G-50凝胶过滤层析进行纯化.SDS-PAGE鉴定了重组蛋白纯度达95%以上.HPLC进一步证明了最终纯化产品的均一性.质谱测定HLMT分子量为38431.3,与理论值基本相符.等电聚焦电泳测定pI为3.0.Western印迹结果表明,HLMT中单链抗体部分具有与活化血小板α-颗粒膜蛋白GMP-140结合特异性.原子吸收分光光度计法(AAS)证明,HLMT中金属硫蛋白保持了原金属结合活性.重组蛋白HLMT可以进一步进行核素标记实验和动物体内血栓显像实验.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙艳	北京大学生命科学学院	38	225	7.0	14.0
2	周波	北京大学生命科学学院	39	452	12.0	20.0
3	茹炳根	北京大学生命科学学院	102	1233	20.0	29.0
4	俞梅敏	北京大学生命科学学院	20	260	9.0	16.0
5	陈昱	北京大学生命科学学院	6	155	3.0	6.0