诱生型一氧化氮合酶FAD结合区的克隆、表达和活性鉴定

• 作者: James.T.Stull Kim S Lau 吴如金 徐洪 智刚 朱东亚 朱敏生 李爱萍
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 一氧化氮合酶 FAD结合区 重组表达 金属螯合层析
• 年，卷（期）: 2001,（4）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 181-184
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2059字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8915.2001.04.001

摘要

诱生型的一氧化氮合酶(iNOS)的表达可以被多种细胞因子、IPS、多种试剂及创伤等诱导,很多疾病的产生发展都与iNOS的过度表达有关.为进一步研究iNOS FAD结合区的功能和特异性抑制肽的筛选,用PCR方法克隆出iNOS FAD结合区编码基因片段(iNOS2031-2660bp),并在大肠杆菌中得到高效表达,得到表达率＞30%的包涵体;经过Ni金属螯合亲和柱层析和电泳纯化,得到纯度＞95%的重组蛋白,相对分子质量为23 000.运用波长扫描,证实纯化蛋白具有与FAD的结合活性,它可以作为筛选iNOS特异性抑制肽的靶蛋白.