人早幼粒白血病 HL 60细胞中蛋白激酶 CK2 纯化、定位及其天然底物研究

• 作者: 刘文 梁念慈 翁云 陈素珍
• 来源期刊: 癌症
• 学科: 生物学
• 关键词: 蛋白激酶CK2 纯化 胞浆 胞核 底物
• 年，卷（期）: 2001,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 734-737
• 页数: 4页
• 分类号: Q51
• 字数: 2911字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-467X.2001.07.014

摘要

目的：纯化人早幼粒白血病 (human promyelocytic leukemia)HL 60细胞的蛋白激酶 CK2，观察蛋白激酶 CK2在 HL 60细胞胞膜、胞浆和胞核中的活性，并寻找 HL 60 细胞中蛋白激酶 CK2的天然底物。方法：采用二次离子交换纤维素 DE 52柱和 Hp Sepharose 4B亲和层析柱分离纯化蛋白激酶 CK2；采用蔗糖梯度离心法分离 HL 60细胞的胞膜、胞浆和胞核；蛋白激酶 CK2活性以掺入到 CK2底物上的 [γ 32P]GTP的 32P放射活度来检测；以 [γ 32P]GTP为磷酸供体，以精胺为激活剂，以肝素为抑制剂，用放射自显影的方法检测底物蛋白磷酸化。结果：经 3次层析后，以 [Arg]3 Ala Asp Ser [Asp]5为底物测得蛋白激酶 CK2纯化了 139倍，回收率 11.8％；以去磷酸酪蛋白为底物测得蛋白激酶 CK2在 HL 60细胞的胞浆和胞核中的活力分别为 (354± 47) U/mg蛋白和 (353± 30) U/mg蛋白；以 [Arg]3 Ala Asp Ser [Asp]5为底物测得蛋白激酶 CK2在 HL 60细胞的胞浆和胞核中的活力分别为 (60± 4) U/mg蛋白和 (66± 9) U/mg蛋白， HL 60细胞胞浆中 59 kDa、 54 kDa、 33 kDa、 28 kDa和 22 kDa的蛋白 ,以及胞核中 77 kDa和 51 kDa 的蛋白质可被蛋白激酶 CK2磷酸化。结论： HL 60细胞中有高活性的蛋白激酶 CK2存在；它主要位于 HL 60细胞的胞浆和胞核中；蛋白激酶 CK2的β亚基有自磷酸化作用； HL 60细胞胞浆中 59 kDa、 54 kDa、 33 kDa、 22 kDa的蛋白和胞核中 77 kDa、 51 kDa的蛋白可能是 CK2的天然底物。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	梁念慈	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	252	1946	22.0	32.0
2	翁云	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	8	18	3.0	4.0
3	刘文	广东医学院生物化学与分子生物学研究所	48	128	6.0	8.0
4	陈素珍	广东医学院分析中心	12	92	5.0	9.0