戊型肝炎病毒结构区ORF2蛋白在巴氏毕赤酵母中的胞内表达与纯化的初步研究

• 作者: 佟玉品 毕胜利 江永珍 詹美云
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 戊型肝炎病毒 开放读码框架 异源基因表达 蛋白纯化 巴氏毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2001,（1）
• 页码范围: 34-37
• 页数: 4页
• 分类号: R373.2|Q781
• 字数: 3177字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-8721.2001.01.007

摘要

为寻求新型表达系统来研制戊型肝炎基因工程疫苗，利用甲醇营养型酵母pichiapastoris表达系统表达戊型肝炎病毒（HEV）结构区ORF2蛋白。采用PCR方法从HEVcDNA中扩增得到的ORF2基因克隆到酵母表达载体pPIC3．5K上，构建成重组质粒pPIC3．5KORF2。该质粒转化酵母菌GS115，经G418筛选得到高拷贝转化子。转化菌株经Mut表型鉴定后，用含甲醇的培养基诱导表达，SDS-PAGE及ELISA筛选高表达活性菌株，放大培养后进行亲合层析纯化。在该系统中成功地表达了高生物活性的HEVORF2蛋白，经亲和层析纯化后扫描分析重组蛋白分子量约为59kD，纯度可达96％。Western blotting证实，它与HEVORF2单克隆抗体有特异性反应。HEV结构区ORF2蛋白在甲醇营养型酵母中的成功表达，以及初步纯化得到的具有强免疫学活性的重组蛋白，为研制新型戊型肝炎基因工程疫苗奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	佟玉品	中国预防医学科学院病毒学研究所	4	39	3.0	4.0
2	江永珍	中国预防医学科学院病毒学研究所	7	46	3.0	6.0
3	毕胜利	中国预防医学科学院病毒学研究所	14	80	5.0	8.0
4	詹美云	中国预防医学科学院病毒学研究所	14	87	5.0	9.0