衣藻肌动蛋白-绿色荧光蛋白的融合基因在烟草悬浮细胞中的表达及融合蛋白的体外聚合

• 作者: 刘国琴 杨毅 阎隆飞
• 来源期刊: 科学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 衣藻肌动蛋白 绿色荧光蛋白 原核表达 真核表达 体外聚合
• 年，卷（期）: 2001,（6）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 461-465,466
• 页数: 6页
• 分类号: Q94
• 字数: 7177字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0023-074X.2001.06.004

摘要

将衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)肌动蛋白(actin)基因(cDNA)与绿色荧光蛋白(green fluore- scence protein, GFP)基因融合后, 分别构建到原核和植物表达载体中, 并在BL21plus细菌和烟草悬浮细胞(BY-2)中进行表达. 通过荧光显微镜观测到重组后的融合蛋白在菌体和烟草悬浮细胞中得到正确表达. 肌动蛋白-绿色荧光蛋白的融合蛋白主要分布在烟草悬浮细胞细胞膜周围, 参与膜骨架的组成, 另外还大量分布于细胞核周围和细胞板的位置, 同时也在细胞内形成丝状结构, 参与F-actin的组成. 将肌动蛋白-绿色荧光蛋白融合基因的原核表达产物经过硫酸铵分级沉淀、离子交换层析和疏水柱层析后, 得以纯化, 并在纯化产物中加入肌动蛋白聚合缓冲液, 纯化的肌动蛋白能聚合成为丝状结构即F-actin, 这表明低等藻类的肌动蛋白具有同高等植物和动物相似的性质和功能.