细胞色素c氧化酶可溶性CUA结构域的表达、分离纯化和初步表征

• 作者: E.de Waal G.W.Canters U.Kolczak 宋爱新 李连之 谢毅 黄仲贤
• 来源期刊: 科学通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 细胞色素c氧化酶CuA结构域蛋白基因表达分离纯化光谱性质
• 年，卷（期）: 2001,（12）
• 所属期刊栏目: 简报
• 页码范围: 1005-1008
• 页数: 4页
• 分类号: Q5
• 字数: 3967字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0023-074X.2001.12.010

摘要

细胞色素c氧化酶亚基Ⅱ含有可溶性双核铜中心CUA结构域蛋白.报道了Paracoccus versutus菌CuA结构域的基因克隆、表达和分离纯化及其初步表征.编码CUA结构域的基因插入pET11d质粒载体中,于E. coli BL21(DE3)中进行表达.结果表明,CuA结构域蛋白在这个表达体系中主要以包涵体的形式存在,表达量占菌体总蛋白的10%左右.经尿素溶解,Cu+/Cu2+重组复性,Q-Sepharose快速阴离子交换柱和Sephadex-G75凝胶过滤柱纯化,得到了电泳纯的紫红色可溶性蛋白.紫外-可见吸收光谱在478nm有较强吸收峰,530nm处有一肩峰,在360和806nm处有弱吸收峰,它们可归属为混价双金属核中心(Cu2S2R2)中Cu-S和Cu-Cu间的电荷转移与轨道相互作用.圆二色谱表明其二级结构主要为β-折叠形式.荧光激发谱最大波长为280 nm,发射谱最大波长为345 nm.