伪狂犬病病毒鄂A株TK－／gG－／LacZ＋突变株的构建

• 作者: 何启盖 吴斌 周复春 方六荣 洪文洲 陈焕春
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 农学
• 关键词: 伪狂犬病病毒 鄂A野毒株 TK－/LacZ+突变株 TK缺失突变株 TK－/gG－/LacZ+突变株
• 年，卷（期）: 2001,（1）
• 页码范围: 69-74
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65
• 字数: 4550字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-8721.2001.01.014

摘要

为了以国内地方分离株鄂A株为亲本构建伪狂犬病病毒双基因缺失株，采用外切酶Ⅲ和绿豆核酸酶酶切，构建了缺失主要毒力基因TK基因部分编码区的重组质粒pSTK1－4，进一步改造成为转移质粒pUCPB4。用HindⅢ将质粒pUCPB4线性化，然后与用EcoRI消化的伪狂犬病病毒鄂A株TK－／LacZ＋突变株基因组DNA共转染PK－15细胞，待完全病变后，收毒作空斑试验，PCR筛选TK缺失的重组病毒。重组病毒空斑纯化3次，随机挑取空斑进行PCR扩增，证实所获得的病毒为均一的无TK－／LacZ＋突变株污染的TK缺失的重组病毒。分别以TK缺失株病毒与鄂A野毒株为模板对TK基因进行PCR扩增，扩增产物经酶切分析和测序后发现：TK缺失重组病毒的TK基因缺失了205个碱基，XhoI和SalI位点消失，SmaI酶切片段发生变化。两种病毒在PK－15细胞上形成空斑的大小和增殖的滴度无明显的差别。进一步提取TK缺失突变株基因组DNA，与含gG－LacZ的转移质粒pUSKZ通过磷酸钙法共转染PK－15细胞，待完全病变后，在X－gal存在下筛选蓝斑，将挑取的蓝斑纯化3次后，对纯化的重组病毒进行TK、LacZ扩增，结果既能扩增出较以鄂A野毒株为模板扩增的要小的TK基因片段，同时又能扩增出LacZ基因，证实所得到的重组病毒为TK－／gG－／LacZ＋突变株。此双缺失突变株的构建成功，为在我国最终根除伪狂犬病提供了有用的工具。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈焕春	华中农业大学畜牧兽医学院动物病毒实验室	331	4866	36.0	53.0
2	何启盖	华中农业大学畜牧兽医学院动物病毒实验室	170	2510	25.0	42.0
3	方六荣	华中农业大学畜牧兽医学院动物病毒实验室	75	818	15.0	24.0
4	吴斌	华中农业大学畜牧兽医学院动物病毒实验室	104	1687	21.0	36.0
5	周复春	华中农业大学畜牧兽医学院动物病毒实验室	10	317	8.0	10.0
6	洪文洲	华中农业大学畜牧兽医学院动物病毒实验室	16	144	7.0	11.0