造血干/祖细胞遗传学修饰对4-氢过氧化环磷酰胺、长春新碱和柔红霉素的联合抗性

• 作者: 周鑫莉 孙等军 方琴 林果为 王季石 费俭 陆华中 陈剑
• 来源期刊: 中国药理学报(英文版)
• 学科: 医学
• 关键词: 基因疗法 MDR基因 遗传载体 基因表达 造血干细胞
• 年，卷（期）: 2001,（10）
• 所属期刊栏目: 研究原著
• 页码范围: 949-955
• 页数: 7页
• 分类号: R96
• 语种: 英文

摘要

目的：探讨经醛脱氢酶基因(ALDH-3)和多药耐药基因(MDRl)遗传学修饰的人外周血造血干/祖细胞能否同时增强活性环磷酰胺(4-HC)和MDRl基因靶药的抗性.方法：构建同时含ALDH-3和MDRl双耐药基因的逆转录病毒表达质粒G1Na-ALDH3-IRES-MDRl，经电穿孔导入PA317包装细胞，将免疫磁珠分离系统(MACS)分离纯化后的人外周血CD34+细胞用含有ALDH-3和MDRl双耐药基因重组病毒的上清感染，用PCR、RT-PCR、Southem blot、Northem blot、ACS和MTT等方法检测外源ALDH-3与MDRl基因在CD34+细胞中的转移和表达.结果：用PCR与酶切分析法鉴定了双顺反子逆转录病毒载体构建的正确性，双耐药基因已整合入转染靶细胞中基因组，并获得有效表达，应用集落计数测定基因转导效率为18％.巢式PCR及补救分析均未检测到辅助病毒存在.经双耐药基因修饰的CD34+造血干/祖细胞对4-HC的IC50较对照组提高4.5倍，对多药耐药基因靶药(长春新碱和柔红霉素)的IC50较未转染细胞分别高6.6和7.8倍.结论：逆转录病毒载体介导双耐药基因转导外周血造血干/祖细胞高效共表达可降低联合化疗骨髓毒性.