携带人凝血因子Ⅸ突变衍生物基因重组腺相关病毒的大量制备与体内外表达研究

• 作者: 卢大儒 王学峰 薛京伦 邱信芳 陆华中 陈立
• 来源期刊: 科学通报
• 学科: 医学
• 关键词: 凝血因子Ⅸ 突变衍生物 重组腺相关病毒 包装系统
• 年，卷（期）: 2001,（10）
• 所属期刊栏目: 简报
• 页码范围: 812-816
• 页数: 5页
• 分类号: Q78|R331
• 字数: 4465字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0023-074X.2001.10.005

摘要

构建了一系列携带有人凝血因子Ⅸ突变衍生物基因(hFⅨR338A)及不同调控元件的腺相关病毒表达载体, 并经体外转导不同的细胞系, 筛选、优化, 挑取高表达质粒及其转导稳定细胞克隆, 然后, 以一个携带有腺相关病毒包装蛋白的rAAV/HSV杂合病毒包装系统介导进行重组腺相关病毒的大量制备, 建立了可进行产业化制备的技术路线及高滴度、大量制备重组腺相关病毒的技术方法, 所获得的重组病毒滴度达1.25×1012病毒颗粒/mL, 然后, 利用这一重组病毒, rhFⅨR338A进行离体及在体表达, 获得了rhFⅨR338A在肌细胞系C2C12及血友病B小鼠体内的高效表达, 表达峰值分别达(2551.32±92.14) ng·(106细胞)-1·(24 h)-1及463.28 ng·mL-1, 与野生型Ⅸ因子的表达水平(2565.76±64.36) ng· (106细胞)-1·(24 h)-1及453.92 ng·mL-1无显著性差异. 然而, 其凝血活性却成倍增加, 约为后者的 2.46倍. 将人凝血因子Ⅸ突变衍生物基因引入血友病B基因治疗研究之中, 同时, 探讨了一个新的包装系统--rAAV/HSV杂合病毒包装系统--在重组AAV载体大量制备中的应用, 为进一步利用重组AAV介导人凝血因子Ⅸ突变衍生物基因进行血友病B基因治疗的临床试验与产业化开发奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢大儒	复旦大学生命科学学院遗传学研究所	137	982	17.0	25.0
2	薛京伦	复旦大学生命科学学院遗传学研究所	51	228	8.0	13.0
3	王学峰	上海第二医科大学附属瑞金医院上海血液学研究所	11	41	4.0	5.0
4	陈立	复旦大学生命科学学院遗传学研究所	39	224	10.0	13.0
5	邱信芳	复旦大学生命科学学院遗传学研究所	17	46	4.0	6.0
6	陆华中	复旦大学生命科学学院遗传学研究所	2	17	2.0	2.0