人胰岛素样生长因子-Ⅰ基因农杆菌工程菌株的构建

• 作者: 周鹏 王跃进 贺普超
• 来源期刊: 西北农林科技大学学报(自然科学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: 胰岛素样生长因子- Ⅰ 化学合成 植物表达载体 重组农杆菌 筛选
• 年，卷（期）: 2001,（3）
• 页码范围: 19-23
• 页数: 5页
• 分类号: Q781
• 字数: 3567字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1671-9387.2001.03.005

摘要

采用固相亚磷酸三酯法人工化学合成了人胰岛素样生长因子-Ⅰ(huIGF-Ⅰ) 基因的4条寡核苷酸片段,再通过片段1、2与3、4末端互补配对和Klenow酶促补平及酶切连接成为完整的huIGF- Ⅰ DNA片段,用EcoRⅠ/PstⅠ酶切后克隆于pGEM T-Easy Vector,经测序证明所得DNA序列与设计的序列完全一致;选用植物偏爱密码子校正了启始密码子ATG下游的6个密码子,并在ATG处增加Kozak序列后,插入pBI121的\{BamH\} Ⅰ/Sac Ⅰ位点,构建了以35S为启动子的植物表达载体;以Hind Ⅲ/EcoR Ⅰ切下"35S-Kozak-IGF-I-NOS(ter.) ”插入pCAMBIA2300之Hind Ⅲ/EcoR Ⅰ位点,构建成huIGF- Ⅰ植物表达载体;通过CaCl2直接转化法将表达载体导入农杆菌EHA105(Rif.r) ,并以菌落原位杂交技术和DNA dot blot对重组农杆菌进行了筛选,所获得的重组农杆菌菌株为培育huIGF- Ⅰ药用植物奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王跃进	西北农林科技大学园艺学院	99	1997	29.0	40.0
2	周鹏	西北农林科技大学园艺学院	8	150	4.0	8.0
3	贺普超	西北农林科技大学园艺学院	22	318	11.0	17.0