重组腺相关病毒转导外源基因入EB病毒转化的B淋巴细胞获长期表达

• 作者: 刘音 史耕先 朱立平 李琳
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 腺相关病毒载体 转导 正义和反义6A8 DNA EB病毒转化的B淋巴细胞
• 年，卷（期）: 2001,（6）
• 所属期刊栏目: 基础免疫学
• 页码范围: 594-599
• 页数: 6页
• 分类号: R392
• 字数: 5193字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2001.06.003

摘要

目的采用重组腺相关病毒(AAV)载体pAGX(+),把6A8 α-甘露糖苷酶基因的正义或反义DNA片段转导入EB病毒转化的B淋巴细胞,以获得正义或反义6A8 DNA长期表达的B淋巴细胞株. 方法构建含正义或反义6A8 DNA片段的重组pAGX(+)质粒.经包装后转导淋巴细胞,经G418筛选,用有限稀释法克隆转导成功的淋巴细胞.Northern杂交和RT-PCR检测转导基因的mRNA表达水平.Con A结合试验检测细胞在转导基因后6A8 α-甘露糖苷酶活性的改变. 结果 pAGX-反义6A8 DNA及pAGX-正义6A8 DNA经包装获得了高复制滴度的重组AAV(rAAV)颗粒,藉助rAAV成功地把6A8基因转导入EB病毒转化的B细胞株SKW6和B淋巴样白血病细胞株BJAB.Northern杂交结果显示,转导的正义或反义6A8 DNA获得表达.经1年余传代培养,RT-PCR检测见BJAB和SKW6细胞中转导的正义或反义6A8 DNA的mRNA表达增加,新霉素抗性基因(neoR)也获得表达,表明转导基因获得了长期表达.Con A结合强度在转导反义6A8 DNA的细胞升高,提示转导反义6A8 DNA可影响6A8 α-甘露糖苷酶的表达. 结论用AAV载体成功地把6A8 α-甘露糖苷酶基因的正义或反义DNA片段转导入EB病毒转化的B淋巴细胞SKW6和B淋巴样白血病细胞株BJAB,转导的基因获得长期表达,并干扰6A8 α-甘露糖苷酶的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李琳	中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院免疫学教研室	47	626	13.0	24.0
2	刘音	中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院免疫学教研室	10	23	4.0	4.0
3	朱立平	中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院免疫学教研室	14	54	5.0	7.0
4	史耕先	中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院免疫学教研室	8	23	4.0	4.0