一种新型的基因表达水平检测方法

• 作者: 万瑜 徐芳玲 文利 杨占秋 杨钢 申元英 肖春惠 肖红
• 来源期刊: 武汉大学学报(医学版)
• 学科: 生物学
• 关键词: 逆转录,聚合酶链反应 生物素 亲和素 血管紧张素Ⅱ,受体 基因表达
• 年，卷（期）: 2001,（4）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 300-303
• 页数: 4页
• 分类号: Q503
• 字数: 3813字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-8852.2001.04.004

摘要

目的:建立一种简便、特异的检测组织血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)受体基因表达变化的半定量逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT- PCR)技术.方法:采用异硫氰酸胍-酚-氯仿法提取组织总RNA,用生物素(biotin, B)标记的AngⅡ受体的特异引物进行RT-PCR扩增,PCR产物纯化后,再与过氧化物酶标记生物素竞争性地结合包被到酶标板上的亲和素(avidin),经过显色反应并测定其吸光度值可反映特异性PCR产物量,从而推断模板核酸中AngⅡ受体基因的相对含量.结果:异硫氰酸胍-酚-氯仿法提取组织总RNA的质量较高;PCR的最适反应条件为94 ℃变性30 s、59 ℃退火40 s、72 ℃延伸60 s,循环33次,最后72 ℃延伸5 min;酶标仪所测阴性对照和扩增产物光密度之差能够反映不同模板中AngⅡ受体基因的相对含量.结论:该方法是一种简便、特异、可行的半定量RT-PCR基因检测技术.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨占秋	武汉大学医学院病毒学研究所	101	1178	18.0	29.0
2	万瑜	武汉大学医学院病毒学研究所	22	72	5.0	7.0
3	杨钢	武汉大学医学院病毒学研究所	17	84	5.0	8.0
4	肖红	武汉大学医学院病毒学研究所	31	634	13.0	24.0
5	文利	武汉大学医学院病毒学研究所	11	114	5.0	10.0
6	徐芳玲	武汉大学医学院病毒学研究所	5	29	4.0	5.0
7	肖春惠	武汉大学医学院病毒学研究所	4	32	4.0	4.0
8	申元英	武汉大学医学院病毒学研究所	2	16	2.0	2.0