人骨形态发生蛋白-2基因的真核表达载体构建

• 作者: 张镜宇 梁东春 沈伟 郭善一 鲍秋野
• 来源期刊: 天津医药
• 关键词: 骨形态发生蛋白质类杆状病毒科转染基因表达
• 年，卷（期）: 2001,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 88-90
• 页数: 3页
• 分类号: R68
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0253-9896.2001.02.010

摘要

目的：利用杆状病毒载体，构建可直接转染昆虫细胞Sf 9 的含人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)基因的重 组穿梭载体(bacmid DNA)，最终获得重组蛋白。方法：将编码包含hBMP-2 N-端信号肽，中间前肽以及C-端成熟肽 共1188bp的cDNA片断，插入真核表达载体pFastBacl的多克隆位点，受控于pPolh启动子，构建成pFastBacl/ hBMP-2重组转移载体。重组子转化大肠杆菌DH10Bac。转座后，挑选阳性菌落，提取bacmid DNA，经PCR鉴定 后，以重组bacmid DNA转染Sf9细胞。收集重组病毒，扩大转染Sf9，表达产物行SDS-PAGE初步鉴定。结果：获 得了含hBMP-2全长cDNA片段的重组bacmid DNA和重组病毒，经SDS-PAGE证实在昆虫细胞中表达了分泌型 hBMP-2蛋白，经激光密度扫描仪扫描显示分泌性蛋白表达量占细胞蛋白总量的35.6％。结论：利用杆状病毒载 体成功构建了可用于直接转染昆虫细胞而无需同源重组的重组bacmid DNA，并在昆虫细胞中表达了分泌型 hBMP-2蛋白。