抗Caspase-3核酶的体外及BRL-3A细胞内活性鉴定

• 作者: 俞红 刘静 周霞秋 廖丹 徐人欢 谢青 金由辛
• 来源期刊: 中华医学杂志(英文版)
• 学科: 医学
• 关键词: 活性鉴定 核酶 BRL-3A caspase-3 凋亡,抑制剂
• 年，卷（期）: 2001,（6）
• 所属期刊栏目: ORGINAL ARTICLES
• 页码范围: 606-611
• 页数: 6页
• 分类号: R3
• 语种: 英文
• DOI: 10.3760/j.issn:0366-6999.2001.06.010

摘要

的体外研究针对大鼠凋亡基因Caspase-3设计的核酶(Rz107)的体外转录，切割及活性鉴定及其在大鼠肝细胞系BRL-3A细胞中的切割活性。 方法将大鼠Caspase-3基因的PCR片段克隆于T载体T7启动子下游,32P标记的体外转录物作为靶RNA。设计并合成针对于大鼠Caspase-3的核酶(Rz107)，将Rz107基因克隆于自我切割核酶载体p1.5的5'-cis-核酶和3'-cis-核酶之间，同样进行32P标记转录。核酶与靶RNA按一定比例和条件保温切割，电泳后放射自显影。将携带有Rz107基因的真核表达质粒pcDNA3.1-Rz107电穿孔至BRL-3A细胞中，通过RT-PCR方法分析Rz107的细胞内剪切活性。 结果 Rz107在37℃有活性。在一定温度范围内，其切割效率随温度升高而升高，最适温度为50℃。其Km为14.13nmol/L, kcat为2.31min-1。在BRL-3A细胞中，Rz107同样具有切割活性，其切割效率为37％。 结论针对caspase-3 mRNA 设计的核酶－Rz107，体外制备具有良好的特异催化切割活性，在体外及BRL-3A细胞内均能有效剪切底物RNA。这不仅对研究凋亡的发生及其机制提供了有利的研究工具，而且可通过抑制凋亡而成为治疗一些肝脏疾病的新方法。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	俞红	上海第二医科大学附属瑞金医院传染病科	29	328	10.0	17.0
2	周霞秋	上海第二医科大学附属瑞金医院传染病科	75	1071	16.0	31.0
3	谢青	上海第二医科大学附属瑞金医院传染病科	62	562	14.0	21.0
4	廖丹	上海第二医科大学附属瑞金医院传染病科	10	78	4.0	8.0
5	徐人欢	上海第二医科大学附属瑞金医院传染病科	5	29	2.0	5.0
6	刘静	中科院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室	3	24	3.0	3.0
7	金由辛	中科院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室	2	25	2.0	2.0