赖型钩端螺旋体与非致病钩端螺旋体差异基因片段的筛选与鉴定

• 作者: 张会东 李学敏 胡昌华 谢勇恩 陈玮 鲍朗
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 年，卷（期）: 2001,（8）
• 所属期刊栏目: 中国病理生理学会炎症发热感染低温专业委员会第八届
• 页码范围: 807
• 页数: 1页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2001.08.113

摘要

目的:利用抑制消减杂交技术(suppression subtractive hybridization, SSH),比较致病与非致病钩体之间基因组差异,筛选致病钩体特有的基因片段,以分析钩体毒力相关基因.方法:以赖型钩体017株为tester,非致病性patoc Ⅰ株为driver进行SSH.用3种四碱基内切酶RsaⅠ、HaeⅢ、AluⅠ分别酶切基因组DNA,选择最适内切酶消化产物(小于2 kb的片段),连接特殊设计的Adaptor进行消减杂交的PCR,得到消减混合物,与T/A克隆载体连接,转化JM109建立差异消减文库,经PCR和Southern blotting筛选鉴定阳性克隆,进而对部分片段进行测序和相似性分析.结果:AluⅠ适于将钩体酶切成用于SSH技术的小片段;经PCR和Southern blotting筛选鉴定得到25个致病钩体中特异存在的阳性克隆,阳性率达到62.5%;序列测定显示插入片段大小为149-1 506 bp,平均480 bp, GC含量从26.30%到51.98%不等,平均36.63%;相似性分析其中6个片段无任何相似性匹配,18个有一定相似性的序列可分为两类:与外膜蛋白或假想蛋白相关和与生化代谢修饰的酶相关.20个序列已被GeneBank收录,收录号分别为AF300873-AF300877,AF325807-AF325821.结论:SSH是一种有效、灵敏的、高特异的比较分析基因组差异的方法,对钩端螺旋体致病基因的筛选、基因组分化、分子遗传研究等具有重要意义;利用SSH技术筛选得到的致病钩体特有消减片段很可能与致病钩体的分子进化和毒力有关,也为我国特有微生物的基因资源开发和基因工程疫苗的设计提供给了重要信息.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	鲍朗	四川大学华西医学中心感染免疫研究室	84	212	7.0	10.0
2	谢勇恩	四川大学华西医学中心感染免疫研究室	10	32	4.0	5.0
3	胡昌华	四川大学华西医学中心感染免疫研究室	7	16	2.0	4.0
4	张会东	四川大学华西医学中心感染免疫研究室	42	109	6.0	8.0
5	陈玮	四川大学华西医学中心感染免疫研究室	13	82	6.0	9.0
6	李学敏	四川大学华西医学中心感染免疫研究室	4	7	2.0	2.0