人血管内皮生长因子受体Flt-1胞外区2-3loop在Pichia.pastoris酵母中的表达、纯化及其生物学活性研究

• 作者: 周小明 张智清 曾革非 王小宁 陈爱君 马骊
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 血管内皮生长因子 Flt-1 毕赤巴斯德酵母 基因表达
• 年，卷（期）: 2001,（2）
• 所属期刊栏目: 分子与细胞免疫学
• 页码范围: 61-65
• 页数: 5页
• 分类号: R392.12
• 字数: 3872字
• 语种: 中文

摘要

目的：研究人Flt-1胞外区2-3loop cDNA在Pichia.pastoris酵母中的表达，获得高 效 表达的具有生物学活性的重组Flt-1(2-3)。方法：采用PCR扩增 Flt-1(2-3)基因，经DNA序列 分析后，插入含AOX1 启动子和α分泌信号肽序列的Pichia.pastoris酵母表达载体中，构 建 重组质粒pPIC9K/Flt-1(2-3)，转化酵母宿主菌GS115，筛选His+Muts表型转化子，摇 瓶培养 ，1%甲醇诱导表达。表达产物经CM-Sepharose FF阳离子交换层析和Sephacryl S-100分子 筛 层析纯化后，测定其生物学活性。结果：SDS-PAGE分析显示，表达产物以可溶性分子形式存 在于上清中，诱导4 d的表达量达上清总蛋白的60%以上。ELISA及Western blot实验表明， 表 达产物具有良好的抗原性和特异性。经CM-Sepharose FF阳离子交换层析和Sephacryl S-1 00 分子筛层析纯化后，Flt-1(2-3)纯度达到90%以上。生物学活性检测证实其具有结合hVEGF 16 5的能力和抑制hVEGF165对HUVEC的促增殖功能。结论： 获得了具有生物学活性的可溶性重组F lt-1受体胞外区2-3loop小片段，为进一步的动物实验和临床应用打下了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周小明	中国人民解放军第一军医大学分子免疫学研究所	21	44	4.0	6.0
2	马骊	中国人民解放军第一军医大学分子免疫学研究所	6	7	1.0	2.0
3	王小宁	中国人民解放军第一军医大学分子免疫学研究所	13	35	3.0	5.0
4	陈爱君	中国人民解放军第一军医大学分子免疫学研究所	3	6	1.0	2.0
5	曾革非	中国人民解放军第一军医大学分子免疫学研究所	1	6	1.0	1.0