摘要:
目的研究体外培养条件下大鼠胰岛凋亡发生及其机制.方法采用网状纤维染色观察大鼠胰岛分离前后网状纤维分布情况;Hoechst 33258荧光染色法,透射电镜法测定培养1,3,7,14,21 d胰岛细胞凋亡率;放射免疫法测定胰岛素24h累积分泌量;MTT比色法间接测定细胞存活率;免疫细胞化学ABC法评价Fas,Fas配体(Fas-L)阳性蛋白表达率.结果大鼠分离后的胰岛网状纤维消失.培养3 d后,电镜观察可见胰岛细胞核皱缩,染色质边集于核膜处等典型的凋亡表现.培养3 d,胰岛凋亡率为(7.6±5.8)%;随培养时间延长,胰岛凋亡率逐渐增加,培养14,21 d,胰岛凋亡率分别为(63.0±2.6)%,(47.2±8.1)%.免疫细胞化学检测Catenin β表达培养7 d消失;Fas阳性蛋白表达率从培养3 d时(8.1±1.8)%上调至14d,21 d时(38.5±4.7)%,(35.6±6.5)%;Fas-L在培养3 d前无表达,培养7 d为(6.8±3.2)%,14 d,21 d显著上调,分别达到(19.6±4.8)%,(12.4±7.1)%.同时,胰岛素24 h累积分泌量,细胞存活率逐渐下降.结论大鼠胰岛在体外培养条件下易发生凋亡;Fas,Fas-L可能参与胰岛凋亡事件的发生和发展.