丙型肝炎病毒NS5A基因在昆虫细胞中的表达及其分布研究

• 作者: 冯磊 刘源洁 叶林柏 吴正辉 徐进平 郜金荣 阮华
• 来源期刊: 中国病毒学
• 学科: 生物学
• 关键词: NCV NS5A 表达 免疫荧光 免疫组化
• 年，卷（期）: 2002,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 60-65
• 页数: 7页
• 分类号: Q78
• 字数: 5046字
• 语种: 英文

摘要

应用PCR方法从含有丙肝病毒全部非结构蛋白基因的质粒pBAC25中扩增出全长的NS5A基因DNA片段(约1.34kb),PCR扩增NS5A基因片段克隆到转移载体pBlueBacHisA中.重组转移质粒pBlueBacHis5A DNA与野生型杆状病毒(AcNPV)DNA共转染SF-9昆虫细胞,通过空斑纯化获得带有NS5A基因的重组病AcNS5A.对重组病毒基因组DNA进行酶切和PCR鉴定,证实HCV NS5A基因已插入重组病毒基因组中.AcNS5A感染SF-9细胞后,在细胞中表达出一条64kD的蛋白,用Western-blot分析,结果表明这种蛋白与抗HCV HS5A特异性抗体发生强烈反应,说明NS5A基因已在细胞中得到表达,应用免疫荧光技术与免疫组化技术进一步研究NS5A蛋白在昆虫细胞中不同时间的表达情况及其分布,结果表明,NS5A蛋白在AcNS5A重组病毒感染细胞24h后主要分布在细胞质膜上,而在48h后则同时分布于细胞质膜和细胞核内,在72h则完全布满整个细胞,我们认为NS5A蛋白定位于质膜和细胞核中,暗示着在病毒复制过程中NS5A蛋白可能参与病毒RNA在质膜上复制和细胞基因表达的调控.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴正辉	武汉大学病毒研究所	16	41	4.0	5.0
2	叶林柏	武汉大学病毒研究所	34	134	7.0	9.0
3	阮华	武汉大学病毒研究所	4	9	2.0	3.0
4	郜金荣	武汉大学病毒研究所	16	56	4.0	6.0
5	徐进平	武汉大学病毒研究所	38	263	9.0	14.0
6	刘源洁	武汉大学病毒研究所	3	5	1.0	2.0
7	冯磊	武汉大学病毒研究所	1	1	1.0	1.0