降低mRNA差异显示技术假阳性率的一种方法

• 作者: 吕有勇 李勇 赵敏 邢宝才 郝纯毅 黄信孚
• 来源期刊: 中国生物化学与分子生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: mRNA差异显示 基因表达 肝癌
• 年，卷（期）: 2002,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 110-114
• 页数: 5页
• 分类号: Q781
• 字数: 4142字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7626.2002.01.022

摘要

为了探讨降低mRNA差异显示技术假阳性率的方法,进一步提高此技术的可靠性,提取了手术切除肝癌及非癌肝组织成对标本的总RNA,逆转录获得cDNA片段,以mRNA差异显示方法筛选差异表达基因,选取较明显的一条差异表达条带,行进一步PCR扩增.分别对PCR产物及其经TA克隆后随机挑选的6个单克隆质粒DNA进行序列分析,并通过GenBank/BLAST数据库进行序列的同源性比较,以Northern杂交予以来源确认.自720余条扩增条带中共选出28条差异条带.序列分析及同源性比较表明,所选择条带的PCR产物为一可能的新基因片段;而随机选择的6个TA克隆质粒DNA中,有4个为同一已知基因片段,一个为另一已知基因片段,一个为一可能的新基因片段.同源性比较表明,PCR产物直接测序所得序列与TA克隆质粒DNA的6个片段不具同源性.结果表明,mRNA差异显示条带可能由1条以上分子量相似的片段构成,直接对PCR产物行序列分析并以其为探针进行Northern杂交,是导致出现假阳性片段的原因之一.将PCR产物进行TA克隆,对单克隆质粒DNA进行序列分析并以其为探针进行Northern杂交,可能是解决此问题的一种较好方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李勇	北京大学临床肿瘤学院	202	2488	22.0	44.0
2	郝纯毅	北京大学临床肿瘤学院	27	156	7.0	12.0
3	赵敏	北京大学临床肿瘤学院	37	528	10.0	22.0
4	邢宝才	北京大学临床肿瘤学院	29	241	8.0	15.0
5	黄信孚	北京大学临床肿瘤学院	14	284	8.0	14.0
6	吕有勇	北京大学临床肿瘤学院	39	418	10.0	19.0