鼻咽癌侯选抑瘤基因BRD7原核表达载体的构建及其表达

• 作者: 余鹰 向娟娟 周鸣 张必成 朱诗国 李小玲 李桂源 聂新民 董利
• 来源期刊: 生物化学与生物物理进展
• 学科: 医学
• 关键词: 鼻咽肿瘤 基因表达 BRD7基因
• 年，卷（期）: 2002,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 631-634
• 页数: 4页
• 分类号: R739.63
• 字数: 721字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3282.2002.04.027

摘要

BRD7基因是一个鼻咽癌侯选抑瘤基因,为了构建BRD7基因的原核表达载体并使其在大肠杆菌得到表达,设计了带有SalⅠ,NotⅠ酶切位点的引物,以已构建好的质粒pGEM-T Easy/BRD7为模板,用PCR扩增出BRD7基因的完整阅读框架,并用SalⅠ,NotⅠ酶切PCR产物和原核表达载体PGEX-4T-2,然后用T4 DNA连接酶将其连接,得到重组表达质粒PGEX-4T-2/BRD7,经双酶切鉴定和测序验证,表达载体构建正确.重组表达质粒转化感受态大肠杆菌Jm105后用IPTG诱导,成功表达了一分子质量约为90 ku的融合蛋白;37℃诱导4 h后,SDS-聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳后,经扫描分析该融合蛋白产量占菌体蛋白总量28.48%, 蛋白质印迹(Western-blot)证实了该融合蛋白的表达获得成功.这为BRD7基因的蛋白纯化及抗体制备,进一步开展其功能研究奠定了基础.