突变型[12Asp]K-ras4B基因的致瘤作用及其机制的探讨

• 作者: 张颖妹 桂黎明 王应 王建六 陈英 马大龙 魏丽惠
• 来源期刊: 癌症
• 学科: 医学
• 关键词: ras基因 致瘤作用 Raf信号通路 转化
• 年，卷（期）: 2002,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 33-38
• 页数: 6页
• 分类号: R730.2
• 字数: 4049字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-467X.2002.01.007

摘要

背景与目的:有资料提示 K-ras基因突变可能与子宫内膜癌的发生有关.本研究在发现子宫内膜腺癌 HEC-1A细胞有 K-ras基因第 12密码子突变的基础上,探讨 [12Asp]K-ras4B突变基因的致瘤性及其发生机制.方法:(1)用 RT-PCR方法扩增 [12Asp]K-ras4B基因全长 cDNA,将此 cDNA插入真核表达载体 pcDI,构建 pcDI-[12Asp]K-ras4B真核表达质粒 ;(2)观察真核表达质粒 pcDI-[12Asp]K-ras4B转染前后细胞形态学改变,用 MTT方法、 3H掺入实验、集落形成实验检测转染前后细胞体外生长的变化,以及用转基因肿瘤细胞裸鼠异种接种成瘤实验,了解 [12Asp]K-ras4B的致瘤作用.结果:(1)成功构建了真核表达质粒 pcDI-[12Asp]K-ras4B.(2)通过转染前后细胞形态学变化、体外增殖变化、软琼脂集落形成实验以及裸鼠皮下转染细胞接种实验,证明 [12Asp]K-ras4B基因具有致瘤作用.(3)将 pCMV-RasN17质粒转染到 pcDI-[12Asp]K-ras4B细胞,与未转染细胞比较,发现 pcDI-[12Asp]K-ras4B细胞增生受到明显抑制.(4)分别将 pCMV-RafS621A和 pCMV-RafCAAX质粒转染到 pcDI-[12Asp]K-ras4B NIH3T3细胞,与未转染的细胞比较,转染 pCMV-RafS621A质粒的 pcDI-[12Asp]K-ras4B细胞增殖受到抑制,与对照组比较差异显著(P< 0.05); 转染 pCMV-RafCAAX质粒的 pcDI-[12Asp]K-ras4B细胞增殖活性加强,与对照组比较差异显著(P< 0.05). 结论:(1)[12Asp]K-ras4B基因单独作用即可诱导 NIH3T3细胞瘤样转化 ;(2)[12Asp]K-ras4B基因诱导的 NIH3T3细胞瘤样转化是通过下游的 Raf信号通路.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王建六	北京大学人民医院妇科	596	4427	29.0	45.0
2	魏丽惠	北京大学人民医院妇科	508	4482	30.0	44.0
3	马大龙	北京大学人类疾病基因研究中心	71	944	16.0	28.0
4	桂黎明	北京大学人民医院妇科	5	14	2.0	3.0
5	张颖妹	北京大学人类疾病基因研究中心	24	343	10.0	18.0
6	王应	北京大学人类疾病基因研究中心	17	108	6.0	10.0
7	陈英	北京大学人类疾病基因研究中心	4	2	1.0	1.0