p53缺失和突变对人肺癌细胞系恶性表型影响的比较

• 作者: 岳文涛 张春彦 张洪涛 李曦 李金照 杨学惠 汪惠 湛秀萍 王玥 赖百塘
• 来源期刊: 中国肺癌杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 正义p53基因 反义p53基因 转染细胞 集落形成 裸鼠移植
• 年，卷（期）: 2002,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 245-249
• 页数: 5页
• 分类号: R734.203
• 字数: 3745字
• 语种: 中文

摘要

目的比较研究外源正义和反义p53对所转染细胞系恶性表型的影响.方法构建正义和反义p53 cDNA真核细胞表达载体pEGFP-p53(RS)和pEGFP-p53(AS),用Lipofectin介导转染801D细胞.PCR检测外源p53和neo基因.荧光显微镜检查转染细胞绿荧光蛋白.免疫组化染色检测突变蛋白表达.比较pEGFP-p53(AS)-801D和pEGFP-p53(RS)-801D的集落形成试验和裸鼠移植试验.用流式细胞术分析细胞周期.结果 PCR检测出外源p53和neo基因存在于细胞,细胞可见绿色荧光.免疫组化检测示pEGFP-p53(AS)-801D突变蛋白呈阴性,母系为阳性,表明反义p53能封闭突变p53蛋白表达.pEGFP-p53(RS)-801D和pEGFP-p53(AS) 801D细胞集落形成率和裸鼠移植成瘤性均降低,pEGFP-p53(RS)-801D更为明显.pEGFP-p53(AS)-801D细胞周期阻滞于G1期.结论在同一细胞背景下,p53缺失比p53突变对恶性增殖起更重要的作用.外源野生型p53在肿瘤细胞中可恢复重建其功能,外源反义p53可封闭突变蛋白表达,阻止细胞停留于G1期.