减毒鼠伤寒沙门氏菌全长hpaA基因工程菌的构建

• 作者: 朱森林 李国庆 胡品津 陈旻湖 陈洁
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 经济
• 关键词: 幽门螺杆菌 hpaA基因 鼠伤寒沙门氏菌 疫苗 重组
• 年，卷（期）: 2002,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 27-32
• 页数: 6页
• 分类号: F378.2
• 字数: 3610字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0001-6209.2002.01.004

摘要

为构建表达HpaA蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌,并探讨以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体构建h.pylori疫苗株的意义,应用PCR法从H.pylori基因组DNA中扩增783bp的hpaA基因,经酶切-连接反应将其克隆入原核表达质粒pTre99A的Nco I-Sal I位点,并进行了核苷酸序列测定.重组质粒转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL3261,提取重组菌质粒,PCR和酶切鉴定,筛选阳性克隆.用SDS-PAGE电泳和Western blot进行HpaA表达分析和鉴定,用薄层扫描分析Hpa含量.重组菌C57BL/6小鼠喂灌,分批两d和10d后处死小鼠,取脾和末段回肠进行细菌培养,挑菌落提质粒鉴定.结果表明,经PCR和酶切证实,构建了含783bp hpaA基因的重组原核表达质粒,并将后者成功转化了减毒鼠伤寒沙门氏菌.重组菌能表达约30kD HpaA蛋白,重组HpaA量约占全菌体蛋白量的38.9%,Western blot证实其有免疫反应性.小鼠重组菌喂灌两d或10d后,脾和末段回肠均发现携目的基因的菌落.这些结果提示,构建了表达 H.pylori HpaA的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌,为制备以减毒鼠伤寒沙门氏菌为抗原释放系统的H.pylori 口服活疫苗进行了有益探索.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡品津		57	1023	12.0	31.0
2	陈旻湖		22	649	10.0	22.0
3	朱森林		10	124	7.0	10.0
4	陈洁		11	152	9.0	11.0
5	李国庆		3	24	2.0	3.0